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亚博国际平台棋牌流式实验中死活染料的重要性&不能及时上机的样本保存方法

类别:公司新闻   发布时间:2022-06-26   浏览:

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Q1:为什么做肿瘤或组织样本免疫亚群分析要标记cd45和死活染料,直接只检测对应的细胞marker不行吗?

A1:确实不行,借一位老师的数据现身说法,在未染死活和cd45时获取的cd11b+f4/80+的巨噬细胞群会夹杂带自发荧光的非免疫细胞从而导致cd206异常升高,从这个结果来看造成的偏差是巨大的,所以,有条件一定要染。

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Q2:样本染色后不能及时上机怎么办?如何保存最稳定?

亚博国际平台棋牌A2:如果不能及时检测能够固定么:可以。

如果不能及时上机检测,可将已经染色的细胞在1-4%的多聚甲醛(或BD Cytofix Buffer,货号:554655)中4℃固定30min,清洗细胞,之后用适量的Stain Buffer重悬细胞,4℃避光保存。固定的细胞需要尽快上机检测一般不应超过72h。

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需要避免的两个误区:

1、并不是一直将样本处于多聚甲醛中!长时间的浸润会使荧光抗体中的荧光素淬灭,一定是固定15-30min后洗掉重悬于staining buffer中。

2、前面已经做过类似固定步骤(例如固定破膜)的细胞如果能确保24h内上机,实际上无需再次固定。如不能,推荐再次固定以稳定胞内抗体的结合。

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